PCR 擴增的步驟

首先將模板 DNA 置于 92℃ -96℃，進行變性（denaturation）處理，使 dsDNA 在高溫下解鏈成為 ssDNA ，且熱變性不改變其化學性質(zhì)；然后退火（annealing） ，將溫度降至 37℃ -72℃，使引物與模板的互補區(qū)相結(jié)合；zui后，在 72℃ 條件下， DNA 聚合酶將 dNTP 連續(xù)加到引物的 3'-OH 端，合成 DNA ，這個步驟稱為延伸（extension）。這三個熱反應(yīng)過程的重復(fù)稱為一個循環(huán)，經(jīng)過 20-40 個循環(huán)可擴增得到大量位于兩條引物之間序列的 DNA 片段。

基本要素與DNA復(fù)制的基本要素是一致的。待拷貝的 DNA 稱為模板，它可以是雙鏈 DNA 也可是單鏈DNA，zui后擴增得到的產(chǎn)物是雙鏈狀態(tài)的。引物是 DNA 復(fù)制的先鋒，就象結(jié)晶過程中的晶核，引導(dǎo) DNA 的合成。在 PCR 擴增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。DNA 聚合酶是 DNA 復(fù)制的動力，在 dNTP 等底物存在時在引物的引導(dǎo)下沿著模板 DNA 合成互補的 DNA 鏈。