1.陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照都出現(xiàn)陽(yáng)性擴(kuò)增帶

　　原因：

　?、訇幮詷悠泛蚉CR反應(yīng)試驗(yàn)污染。

　?、陔娪旧蠘訒r(shí)避免PCR產(chǎn)物漂移到其他孔而影響結(jié)果判定。

　　解決方法：

　?、俑鼡Q全部試劑，必要時(shí)更換所有移液器。

　?、趹?yīng)小心操作，或瓊脂糖凝膠加厚，增加每孔的容量，可避免加樣液的溢出。

　　2.陽(yáng)性對(duì)照呈陰性

　　原因：

　?、訇?yáng)性樣品或加入陽(yáng)性模板失效。無論是組織還是血清，凍融1次后病原數(shù)量明顯減少。

　?、诩尤朐噭┝坎粶?zhǔn)確或遺忘了某一成分。

　　解決方法：

　　①將陽(yáng)性對(duì)照樣品分成小包裝。每個(gè)包裝夠用1次好。

　?、谧屑?xì)核對(duì)試驗(yàn)記錄，校對(duì)移液器。

　　3.出現(xiàn)非特異擴(kuò)增帶

　　原因：

　?、贅悠纺０辶窟^多。

　　②引物或TaqDNA聚合酶多。

　?、坻V離子濃度過高或退火溫度過低。

　　解決方法：

　　依據(jù)熒光定量PCR儀具體實(shí)驗(yàn)的情況，分析上述可能出現(xiàn)的原因，采取相應(yīng)的措施。

　　4.陽(yáng)性對(duì)照擴(kuò)增帶弱

　　原因：

　?、匐娪緯r(shí)瓊脂糖中EB含量少或長(zhǎng)時(shí)間后再用已失效。

　?、跀U(kuò)增效率不高。

　　解決方法：

　　①是將瓊脂糖凝膠放入含有EB電泳液中再染30 min后再觀察。

　　②檢測(cè)儀器是否正常工作。

　　③增加純化DNA或cDNA樣品的稀釋倍數(shù)。